EPI300感受態(tài) CC96163 返回列表頁

■ 產(chǎn)品簡介

EPI300菌株含有一個突變的trfA基因，該基因表達(dá)出的蛋白產(chǎn)物可以促進(jìn)含有oriV復(fù)制子的質(zhì)粒的高拷貝復(fù)制。在非誘導(dǎo)情況下，當(dāng)含有oriV復(fù)制子質(zhì)粒的EPI300菌株在LB/2YT或SOB培養(yǎng)基中生長時，trfA基因的表達(dá)被抑制，oriV復(fù)制子質(zhì)粒的拷貝數(shù)維持在很低的水平；當(dāng)在培養(yǎng)基中加入誘導(dǎo)劑CopyMore 300 (#96001)時，oriV復(fù)制子質(zhì)粒的拷貝數(shù)可維持在很高的水平，提高了質(zhì)粒產(chǎn)量。[mrr-hsdRMS-mcrBC]基因型使EPI300菌株適合于克隆富含甲基胞嘧啶或甲基腺嘌呤的DNA(例如：哺乳動物基因組DNA)。recA1和 endA1的突變有利于插入DNA的穩(wěn)定和高純度質(zhì)粒DNA的提取。lacZΔM15標(biāo)記的存在使EPI300可用于藍(lán)白斑篩選，rpsL賦予其鏈霉素抗性。因此，EPI300菌株特別適合于各種不穩(wěn)定DNA或在常規(guī)菌株中得率偏低的質(zhì)粒克隆。經(jīng)pUC19質(zhì)粒轉(zhuǎn)化檢測，EPI300感受態(tài)細(xì)胞的轉(zhuǎn)化效率可達(dá)107 cfu/μg DNA。

■ 產(chǎn)品優(yōu)勢

● 高轉(zhuǎn)化效率：>1x107 cfu/µg pUC19 DNA
● 適合于各種不穩(wěn)定DNA或在常規(guī)菌株中得率偏低的質(zhì)?？寺?/span>

■ 產(chǎn)品組成

基因型：F– mcrA Δ(mrr-hsdRMS-mcrBC) φ80dlacZΔM15 ΔlacX74 recA1 endA1 araD139 Δ(ara, leu)7697 galU galK λ– rpsL nupG trfA dhfr 

■ 存儲條件

-80℃保存；請勿將本品置于-20℃或者液氮中保存!

■ 產(chǎn)品應(yīng)用

EPI300菌株適合于各種不穩(wěn)定DNA或在常規(guī)菌株中得率偏低的質(zhì)?？寺?。

■ 使用方法

1. 解凍感受態(tài)細(xì)胞：從-80 ℃取出感受態(tài)細(xì)胞，冰上融化約5-10 min，然后立即進(jìn)行DNA樣品的轉(zhuǎn)化。

2. DNA樣品的轉(zhuǎn)化：每100 μL感受態(tài)可加入0.5-10 μL待轉(zhuǎn)化DNA樣品（例如質(zhì)粒、連接產(chǎn)物或重組產(chǎn)物等），然后輕輕彈擊管底約5-6次，立即冰上靜置孵育30 min。

• 待轉(zhuǎn)化DNA樣品的加入體積不宜超過感受態(tài)細(xì)胞體積的1/10。

• 加入待轉(zhuǎn)化DNA樣品后應(yīng)輕柔彈擊混勻，避免使用移液槍劇烈吹打混勻。

• 用于質(zhì)粒的轉(zhuǎn)化時可將冰浴時間縮短至5-10 min；用于連接產(chǎn)物或重組產(chǎn)物轉(zhuǎn)化時，建議冰浴時間為15-30 min以提高轉(zhuǎn)化效率。

3. 熱激處理：冰浴后，將裝有感受態(tài)和DNA樣品的的離心管快速置于42℃水浴中，靜置熱激90 s。隨后立即轉(zhuǎn)移至冰上靜置2-3 min以快速冷卻。

• 熱激時間需要精確控制在45-90 s。

• 熱激及轉(zhuǎn)移至冰浴過程中禁止晃動離心管。

4. 復(fù)蘇培養(yǎng)：加入900 μL 室溫或37 ℃預(yù)熱的LB培養(yǎng)基（或SOC培養(yǎng)基等），上下顛倒數(shù)次混勻，然后將離心管傾斜放置在恒溫?fù)u床中，37℃ 220 rpm復(fù)蘇培養(yǎng)45 min。

• 37℃為常規(guī)復(fù)蘇溫度，若轉(zhuǎn)入質(zhì)粒對溫度敏感或其它特殊情況需根據(jù)實驗要求設(shè)置合適的溫度。

5. 收菌涂板：用于質(zhì)粒轉(zhuǎn)化時，復(fù)蘇后可直接取50-100 μL菌液涂板；用于連接產(chǎn)物或重組產(chǎn)物轉(zhuǎn)化時，建議先5000 g，1 min室溫離心，吸棄約900 μL上清，然后用剩余的約100 μL重懸菌液，涂布到含相應(yīng)抗生素的LB平板上。

6. 過夜培養(yǎng)：將平板倒置放于37℃培養(yǎng)箱培養(yǎng)過夜。

• 培養(yǎng)前需要將平板在超凈臺中稍微晾至無明顯水漬，有利于形成單克隆。

• 37℃為常規(guī)培養(yǎng)溫度，若轉(zhuǎn)入質(zhì)粒對溫度敏感或其它特殊情況需根據(jù)實驗要求設(shè)置合適的溫度。

■ 相關(guān)參數(shù)