S17-1(λpir) 感受態 CC96152 返回列表頁

注：本產品為定制產品，如需購買請聯系我們。

■ 產品簡介

S17-1 λpir菌株的染色體中整合了RP4-2質粒，該質粒可以攜帶染色體的部分DNA在接合菌株之間轉移。S17-1 λpir菌株缺失核酸內切酶(endA1)，提高了質粒DNA的產量和質量；同時為重組酶缺陷型(recA1)，減少插入片段的同源重組概率，保證了插入DNA的穩定性。Tn7賦予該菌株弱的鏈霉素抗性。S17-1λpir菌株含有pir基因(λpir)。經pUC19質粒轉化檢測，S17-1 λpir感受態細胞的轉化效率可達108 cfu/μg DNA。

■ 產品優勢

● 高轉化效率：>1x108 cfu/µg pUC19 DNA
● 可用于高效的質粒克隆

■ 產品組成

基因型：RP4-2 (Km::Tn7, Tc::Mu-1) pro-82 λpir recA1 endA1 thiE1 hsdR17 creC510 

■ 存儲條件

-80℃保存；請勿將本品置于-20℃或者液氮中保存!

■ 產品應用

S17-1(λpir)可用于高效的質粒克隆。

■ 使用方法

1. 解凍感受態細胞：從-80 ℃取出感受態細胞，冰上融化約5-10 min，然后立即進行DNA樣品的轉化。

2. DNA樣品的轉化：每100 μL感受態可加入0.5-10 μL待轉化DNA樣品（例如質粒、連接產物或重組產物等），然后輕輕彈擊管底約5-6次，立即冰上靜置孵育30 min。

• 待轉化DNA樣品的加入體積不宜超過感受態細胞體積的1/10。

• 加入待轉化DNA樣品后應輕柔彈擊混勻，避免使用移液槍劇烈吹打混勻。

• 用于質粒的轉化時可將冰浴時間縮短至5-10 min；用于連接產物或重組產物轉化時，建議冰浴時間為15-30 min以提高轉化效率。

3. 熱激處理：冰浴后，將裝有感受態和DNA樣品的的離心管快速置于42℃水浴中，靜置熱激90 s。隨后立即轉移至冰上靜置2-3 min以快速冷卻。

• 熱激時間需要精確控制在45-90 s。

• 熱激及轉移至冰浴過程中禁止晃動離心管。

4. 復蘇培養：加入900 μL 室溫或37 ℃預熱的LB培養基（或SOC培養基等），上下顛倒數次混勻，然后將離心管傾斜放置在恒溫搖床中，37℃ 220 rpm復蘇培養45 min。

• 37℃為常規復蘇溫度，若轉入質粒對溫度敏感或其它特殊情況需根據實驗要求設置合適的溫度。

5. 收菌涂板：用于質粒轉化時，復蘇后可直接取50-100 μL菌液涂板；用于連接產物或重組產物轉化時，建議先5000 g，1 min室溫離心，吸棄約900 μL上清，然后用剩余的約100 μL重懸菌液，涂布到含相應抗生素的LB平板上。

6. 過夜培養：將平板倒置放于37℃培養箱培養過夜。

• 培養前需要將平板在超凈臺中稍微晾至無明顯水漬，有利于形成單克隆。

• 37℃為常規培養溫度，若轉入質粒對溫度敏感或其它特殊情況需根據實驗要求設置合適的溫度。

■ 相關參數