漢坦病毒熒光定量PCR檢測(cè)方案

1951-1953年3000多名士兵感染了一種急性發(fā)熱同時(shí)伴腎功能衰竭以致休克的疾病，該病發(fā)生于漢坦河流域，因此以“漢坦"命名。直到1976年，韓國(guó)李鎬汪從黑線姬鼠的肺組織中分離出了漢坦病毒。

漢坦病毒(Hantavirus, HV)屬于布尼亞病毒科家族，是有包膜分節(jié)段的單股負(fù)鏈RNA病毒。病毒顆粒多數(shù)呈圓形或卵圓形，直徑大小為為80~120nm。漢坦病毒的基因組由三個(gè)基因片段組成，分別是小(S)?中(M)和大(L) 3個(gè)片段，每個(gè)片段分別編碼病毒的核衣殼蛋白(NP)?糖蛋白(GP)的G1和G2?RNA聚合酶。正漢坦病毒屬可感染人類并致病。宿主是嚙齒動(dòng)物（鼠、田鼠、棉鼠等）。也可感染人類，引發(fā)腎綜合征出血熱（HFRS）與漢坦病毒肺綜合征（HPS）。感染人類病毒代表種：是漢灘病毒（HTNV）、漢城病毒（SEOV）等。

漢坦病毒的PCR 檢測(cè)是RT - PCR（逆轉(zhuǎn)錄 PCR），包括普通 RT - PCR、實(shí)時(shí)熒光 RT - PCR。RT - PCR：先以逆轉(zhuǎn)錄酶將病毒 RNA 反轉(zhuǎn)錄為 cDNA，再用引物擴(kuò)增漢坦病毒片段，通過(guò)電泳判讀產(chǎn)物。實(shí)時(shí)熒光 RT - PCR：在 RT - PCR 體系中加入TaqMan 探針，擴(kuò)增時(shí)熒光信號(hào)累積，通過(guò)Ct 值定量和定性判斷。

翼和生物漢坦病毒HANT、小鼠肺炎病毒PVM、小鼠細(xì) 小病毒MVM多重qPCR鑒別試劑盒，在必檢病毒聯(lián)檢試劑盒 的基礎(chǔ)上設(shè)計(jì)，用于對(duì)檢出的陽(yáng)性樣本進(jìn)一步確認(rèn)所感染的病毒。

試劑盒采用多套引物探針，在FAM（漢坦病毒HANT），HEX（小鼠肺炎病毒PVM），ROX（小鼠細(xì)小病毒MVM）三個(gè)通道檢測(cè)3種病毒，另外一套引物探針在CY5通道檢測(cè)內(nèi)參RNA。該試劑盒具有以下特點(diǎn)：

靈敏：檢測(cè)靈敏度較高，10 copies/μL可被有效檢出。

穩(wěn)定：全程閉管操作，無(wú)交叉污染。

可靠：含內(nèi)參基因，避免假陰性。

方便：操作簡(jiǎn)單，一步法檢測(cè)。