DeNovix自動細胞計數儀樣本制備要求

　　DeNovix 自動細胞計數儀憑借精準、快速的檢測優勢，被廣泛應用于細胞濃度、活力分析等實驗場景，樣本制備的規范性直接決定檢測結果的準確性。以下為該儀器的樣本制備核心要求：
 

　　一、 樣本前處理基礎要求
 

　　細胞懸液狀態控制
 

　　待測細胞需處于充分分散的單細胞懸液狀態，避免細胞團塊、聚集體的存在。若為貼壁細胞，需使用胰酶等消化試劑充分消化，消化后加入完全培養基終止反應，反復吹打 10-15 次，確保細胞分散均勻；若為懸浮細胞，可直接輕柔吹打混勻。
 

　　雜質與碎片清除
 

　　細胞懸液中若存在培養基殘渣、細胞碎片、死細胞過多等情況，會干擾計數結果?？赏ㄟ^低速離心(1000-1500 rpm，5 min)洗滌細胞 2-3 次，棄去上清液，再用 PBS 或培養基重懸細胞；對于碎片較多的樣本，可通過 200 目篩網過濾后再進行后續操作。
 

　　二、 樣本濃度與稀釋要求
 

　　濃度適配范圍
 

　　DeNovix 自動細胞計數儀的最佳檢測濃度為 1×10? - 1×10? 個 /mL，超出該范圍會導致計數偏差。
 

　　若細胞濃度過高，需使用 PBS、生理鹽水或無血清培養基進行梯度稀釋，稀釋時保證稀釋液與細胞懸液充分混勻，避免局部濃度不均。
 

　　若細胞濃度過低，可通過離心濃縮(1500 rpm，5 min)后，棄去部分上清液重懸，提高細胞濃度。
 

　　稀釋液選擇原則
 

　　稀釋液需與細胞相容性良好，避免使用高滲透壓、強酸堿溶液，防止細胞裂解或形態改變。常規細胞可選用 PBS 或培養基；對于特殊敏感細胞，需使用專用細胞保存液。
 

　　三、 染色處理要求(針對活力計數)
 

　　染色劑選擇與配比
 

　　進行細胞活力檢測時，常用臺盼藍染色法，染色劑與細胞懸液需按照 1:1 體積比混合，例如取 10 μL 細胞懸液 + 10 μL 0.4% 臺盼藍染液，輕柔吹打混勻。
 

　　染色劑需現配現用，或嚴格按照說明書要求儲存，避免染液變質影響染色效果。
 

　　染色時間控制
 

　　混合后需在 3-5 min 內完成上樣檢測，染色時間過長會導致活細胞被臺盼藍滲透，造成活力計數結果偏低。
 

　　四、 上樣前樣本處理要求
 

　　樣本混勻操作
 

　　上樣前需再次輕柔吹打細胞懸液(或染色后的混合液)3-5 次，確保細胞均勻分布，取懸液中層液體作為待測樣本，避免吸取底部沉淀或上層泡沫。
 

　　避免氣泡產生
 

　　樣本制備全程需避免劇烈震蕩，防止產生氣泡。若懸液中存在氣泡，可靜置 1-2 min 待氣泡消散，或用移液器輕輕吸走氣泡，否則氣泡會遮擋計數視野，造成結果誤差。
 

　　五、 樣本制備的注意事項
 

　　所有接觸樣本的耗材(移液器吸頭、離心管等)需為無菌無酶材質，防止污染細胞。
 

　　樣本制備需在無菌環境下操作，減少外界微生物污染，同時避免環境中的灰塵、雜質落入懸液。
 

　　不同類型細胞的制備方法可根據細胞特性適當調整，例如干細胞、原代細胞需減少吹打次數，避免細胞損傷。