一、高通量動(dòng)態(tài)光散射儀操作前準(zhǔn)備
環(huán)境要求
選擇平穩(wěn)、干燥、溫度適宜的場所安裝儀器，確保儀器底部與地面平穩(wěn)接觸，光路垂直地面，且儀器底部離地面至少50cm。
避免空氣流動(dòng)、震動(dòng)及強(qiáng)電磁干擾源(如大型電機(jī)、高頻設(shè)備)，確保測量環(huán)境穩(wěn)定。
樣品制備
分散性：樣品需均勻分散在液體介質(zhì)中，避免團(tuán)聚或沉淀。分散劑需透明、與溶質(zhì)粒子折光指數(shù)不同、干凈且可過濾。
濃度控制：
蛋白質(zhì)樣品：14kDa蛋白濃度建議1mg/ml，28kDa蛋白濃度建議0.5mg/ml。
其他樣品：根據(jù)粒徑大小調(diào)整濃度，避免多重光散射(濃度過高)或信號(hào)過弱(濃度過低)。
除氣泡：樣品需12,000rpm離心10分鐘，取上清液，避免氣泡影響測量。
樣品量：樣品池容量約14μl，建議準(zhǔn)備20μl樣品以確保填滿。
儀器檢查
檢查電源、連接線、光路系統(tǒng)是否正常，確保激光器、探測器、溫控模塊等部件連接牢固。
預(yù)熱儀器10-15分鐘，待系統(tǒng)穩(wěn)定后進(jìn)行測量。
二、開機(jī)與軟件連接
開機(jī)步驟
接通電源，依次打開主機(jī)、溫控模塊及計(jì)算機(jī)電源。
運(yùn)行測量軟件(如Zetasizer、IRSoft等)，點(diǎn)擊“Connect”或“Hardware”建立軟件與儀器的連接，確認(rèn)連接成功后圖標(biāo)變綠。
參數(shù)設(shè)置
激光強(qiáng)度：根據(jù)樣品濃度調(diào)整(高濃度樣品需降低功率以避免信號(hào)過載)。
溫度：設(shè)置測量溫度(如25℃)，恒溫120秒使樣品溫度穩(wěn)定。
溶劑參數(shù)：輸入溶劑的折光率(RI)和粘度(Viscosity)，參數(shù)隨溫度變化需實(shí)時(shí)更新。
樣品參數(shù)：輸入樣品的折光率(RI)和吸收率(Absorption)，如蛋白質(zhì)樣品需選擇“Material”類型并輸入對(duì)應(yīng)參數(shù)。
測量時(shí)間：根據(jù)樣品穩(wěn)定性設(shè)置(如連續(xù)測量3次，每次120秒)。
散射角度：通常選擇90°(小顆粒)或173°(大顆粒)。
數(shù)據(jù)過濾：設(shè)置偏差范圍(如Baseline=1±0.003)，過濾異常數(shù)據(jù)。
三、樣品放置與測量
樣品池清洗
用水沖洗微量取液器和樣品池，避免污染。
使用微量取液器將樣品緩慢注入樣品池，避免針頭刮碰池底或側(cè)壁。
將樣品池放入樣品室，確保箭頭朝向自己，蓋上樣品室蓋子。
數(shù)據(jù)采集
點(diǎn)擊“Start”或“Measure”開始測量，儀器自動(dòng)記錄散射光強(qiáng)度隨時(shí)間的變化。
測量過程中避免觸碰儀器或樣品池，防止光路偏移。
紅色數(shù)據(jù)為超出設(shè)定范圍的值，分析時(shí)不采用。
四、數(shù)據(jù)分析與存儲(chǔ)
粒徑分布
軟件自動(dòng)計(jì)算流體力學(xué)半徑(Rh)及多分散性指數(shù)(PDI)，生成粒徑分布圖(如對(duì)數(shù)正態(tài)分布、MSD多尺寸分布)。
相關(guān)性函數(shù)
分析光強(qiáng)波動(dòng)與時(shí)間的關(guān)系，評(píng)估樣品均一性。
數(shù)據(jù)導(dǎo)出
保存為CSV、Excel或PDF格式，便于進(jìn)一步處理或報(bào)告生成。
五、操作后維護(hù)
樣品池清洗
測量完成后，立即用水沖洗樣品池，吹干后存放，避免殘留樣品污染。
光學(xué)元件清潔
定期清潔光學(xué)元件(如激光窗口、探測器)，使用無塵布或?qū)Ｓ们逑磩?br />
儀器檢查
檢查儀器內(nèi)部是否有雜物或塵埃，保持光路系統(tǒng)干燥管吸潮狀態(tài)(如吸潮需烘干再生)。
定期使用標(biāo)準(zhǔn)粒子(如聚苯乙烯乳膠)進(jìn)行校準(zhǔn)，確保測量準(zhǔn)確性。
存儲(chǔ)環(huán)境
儀器不使用時(shí)，存放在干燥、通風(fēng)、無腐蝕性氣體的環(huán)境中，斷開電源并蓋上防塵罩。
避免與危險(xiǎn)化學(xué)品接觸，防止安全事故。
六、高通量動(dòng)態(tài)光散射儀常見問題處理
光散射強(qiáng)度過高
現(xiàn)象：儀器出現(xiàn)自保護(hù)提示。
原因：樣品濃度過高或粒徑較大。
解決：降低樣品濃度或調(diào)整激光強(qiáng)度。
數(shù)據(jù)均一性差
現(xiàn)象：相關(guān)性函數(shù)波動(dòng)大。
原因：樣品不均一或存在大顆粒。
解決：重新離心樣品，確保分散均勻。
光路偏移
現(xiàn)象：測量數(shù)據(jù)異常。
原因：操作過程中觸碰儀器或樣品池。
解決：重新調(diào)整光路，確保光路、物體和探測器之間的垂直和平行關(guān)系。
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