原方法回收率低？迪馬科技讓蜂產品雙甲脒檢測大不同

檢測樣品：蜂產品

檢測項目：雙甲脒

方案概述：迪馬科技參考GB 31657.8-2025重現了此方法，使用磷酸二氫鉀緩沖液溶解樣品，乙腈提取，使用我司色譜柱Leapsil® C18，100x4.6mm，2.7μm (Cat.#: 86002)進行測定，基質匹配標準溶液進行計算，添加水平為5μg/kg的蜂蜜樣品加標回收率可做到雙甲脒51%-63%，2,4-二jia ji ben an80%-86%；

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更新時間2026年02月10日

上傳企業北京迪科馬科技有限公司（迪馬科技）

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蜂產品中雙甲脒及其代謝物殘留量的測定

參考GB 31657.8-2025 《食品安全國家標準蜂產品中雙甲脒及其代謝物殘留量的測定液相色譜-串聯質譜法》

雙甲脒是一種常用于畜牧業和農業的廣譜殺蟲劑，通過干擾蟲類神經遞質的代謝達到防治病蟲的效果，蜂產品中使用可以達到防治蜂螨的效果。雙甲脒化學性質不穩定，在生物體內易代謝成具有致癌性的2,4-二 jia ji ben an，對人體健康造成威脅。GB 31650-2019《食品安全國家標準食品中獸藥zui da 殘留can liu 》規定牛、羊、豬及蜂蜜中的xian liang為0.4mg/kg, 并將雙甲脒及其代謝產物 2,4-二 jia ji ben an的總和作為殘留標志物。

GB 31657.8-2025 《食品安全國家標準蜂產品中雙甲脒及其代謝物殘留量的測定液相色譜-串聯質譜法》是由中華人民共和國nong ye nong cun 部、guo jia 衛生健康委員會和國家市場jian du guan 理總局三大部委聯合發布的重要技術標準。該標準已于2025年6月3日發布，并定于2025年9月1日起正式實施。本方法使用液相色譜串聯質譜進行測定，具有更高的靈敏度和更低的檢出限。

迪馬科技參考GB 31657.8-2025重現了此方法，使用磷酸二氫鉀緩沖液溶解樣品，乙腈提取，使用我司色譜柱Leapsil^® C18，100x4.6mm，2.7μm (Cat.#: 86002)進行測定，基質匹配標準溶液進行計算，添加水平為5μg/kg的蜂蜜樣品加標回收率可做到雙甲脒51%-63%，2,4-二 jia ji ben an 80%-86%；添加水平為10μg/kg的蜂王漿樣品加標回收率可做到雙甲脒60%-72%，2,4-二 jia ji ben an 65%-73%。

經過大量實驗測試，原方法重現性較差，且回收率偏低。我司對緩沖鹽的使用進行了優化，使用弱堿性的磷酸氫二鉀緩沖液代替磷酸二氫鉀后，減弱了前處理過程中雙甲脒的代謝速率，降低了由于大量代謝中間產物反應不che di造成的回收率損失，有利于實驗結果的重現，更容易達到標準中批內樣品相對標準偏差≤20%的要求。使用0.2mol/L磷酸氫二鉀作為緩沖液后，回收率普遍提升了30%左右，大大降低了假陰性風險，增加了定量分析的準確性。

由于原方法做蜂王漿樣品有強基質效應，我司增加了凈化步驟，經過大量實驗，使用我司ProElut^® PMR 150mg/3mL(Cat.#: 65996)對樣品提取液凈化后，對目標物不產生吸附的同時，蜂王漿樣品可由強基質效應降低為中等基質效應，減少了樣品對離子源的污染并增加了儀器使用壽命，該凈化方法簡單、快捷，客戶可根據實際需求選擇使用。

適用范圍

本方案適用蜂蜜和蜂王漿雙甲脒和2,4-二 jia ji ben an的測定。

標準品配制

(1) 雙甲脒和2,4-二 jia ji ben an混合標準儲備液：由迪馬科技標準品部提供(Cat.#: 48872)，濃度為100μg/mL溶于乙腈。

(2) 雙甲脒和2,4-二 jia ji ben an混合標準中間液Ⅰ：準確吸取適量雙甲脒和2,4-二 jia ji ben an混合標準儲備液，用50%乙腈水配制成標準中間液Ⅰ，濃度為5.0μg/mL。

(3) 雙甲脒和2,4-二 jia ji ben an混合標準中間液Ⅱ：準確吸取適量雙甲脒和2,4-二 jia ji ben an混合標準中間液Ⅰ，用50%乙腈水配制成標準中間液Ⅱ，濃度為125ng/mL。

(4) 雙甲脒和2,4-二 jia ji ben an混合標準中間液Ⅲ：準確吸取適量雙甲脒和2,4-二 jia ji ben an混合標準儲備液，用50%乙腈水配制成標準中間液Ⅲ，濃度為1.0μg/mL。

(5) 雙甲脒和2,4-二 jia ji ben an混合標準中間液Ⅳ：準確吸取適量雙甲脒和2,4-二 jia ji ben an混合標準中間液Ⅲ，用50%乙腈水配制成標準中間液Ⅳ，濃度為25ng/mL。

提取

蜂蜜：

(1) 稱取5g樣品于50mL塑料離心管中；

(2) 向離心管中加入5mL 0.2mol/L磷酸氫二鉀溶液；

(3) 向離心管中加入5mL乙腈，振蕩5min；

(4) 向離心管中加入5g氯化鈉和5g無水硫酸鎂，立即搖勻，振蕩5min；

(5) 冷水浴5min；

(6) 8000rmp離心5min；

(7) 移取上清液至另一個離心管中待凈化。

蜂王漿：

(1) 稱取2g樣品于50mL塑料離心管中；

(2) 向離心管中加入2mL 0.2mol/L磷酸氫二鉀溶液；

(3) 向離心管中加入10mL乙腈，振蕩5min；

(4) 向離心管中加入3g氯化鈉和3g無水硫酸鎂，立即搖勻，振蕩5min；

(5) 冷水浴5min；

(6) 8000rmp離心5min；

(7) 移取上清液至另一個離心管中待凈化。

凈化

ProElut^® PMR 150mg/3mL (Cat.#: 65996)

樣品：準確吸取2mL待凈化液于PMR小柱，接收流出液，吸取流出液0.5mL于2mL玻璃進樣瓶(Cat.#: 1033)，加入0.5mL水，混勻，經0.22μm PTFE濾膜過濾(Cat.#: 37178)，待測定。

基質匹配混合標準工作液：準確吸取2mL空白樣品待凈化液于PMR小柱，接收流出液，吸取流出液0.5mL于2mL玻璃進樣瓶(Cat.#: 1033)，加入適量標準中間液，用水定容至1mL，混勻，經0.22μm PTFE濾膜過濾(Cat.#: 37178)，待測定。

分析條件

UPLC條件

色譜柱：Leapsil^® C18，100 x 4.6mm，2.7μm (Cat.#: 86002)

流速：0.3mL/min

進樣量：10μL

柱溫：35℃

流動相：A:0.1%甲酸水溶液 B:甲醇

質譜條件

電離模式: ESI

掃描方式: 正離子掃描

檢測方式: 多反應監測

電噴霧電壓: 4500V

霧化氣壓力: 50psi

輔助氣壓力: 50psi

氣簾氣壓力: 20psi

離子源溫度: 500℃

添加回收、基質效應結果

雙甲脒及2,4-二 jia ji ben an的XIC圖

注意事項

1. 液相條件為反向條件下，2,4-二 jia ji ben an 在普通C18色譜柱上保留很弱，在50%乙腈水的溶劑條件下，洗脫能力太強，容易有溶劑效應，經過測試，使用我司色譜柱Leapsil^® C18，100 x 4.6mm，2.7μm (Cat.#: 86002)進行實驗，對目標物有較好的保留，并且能消除溶劑效應。

2. 蜂王漿樣品除了比蜂蜜樣品有更強的基質影響，在進樣過程中，還有更快的代謝速率。代謝速率測定實驗結果顯示，蜂王漿在等待進樣過程中，每過1小時，就會產生2%的代謝物，蜂蜜產生0.5%的代謝物，建議自動進樣器設置低溫，降低雙甲脒代謝速率。

3. 本方法在原方法基礎上進行了優化，使用磷酸氫二鉀替換了磷酸二氫鉀，降低了代謝中間產物的不穩定性，提升了回收率，加標回收結果的重現性更好。

4. ProElut^® PMR凈化小柱對樣品中的脂類有很強的選擇性吸附，同時不吸附目標物。兩種添加水平的蜂王漿樣品的基質效應從24.8%、16.4%分別提升到55.6%、40.4%，除了降低基質效應的效果非常明顯，上樣后，小柱上也殘留有色雜質，見下圖：